磺胺類藥物殘留檢測方法

作者：新芝生物　發(fā)布日期：2022-01-20

磺胺類藥物是一種具有對氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的抗生素，具有廣譜抗菌效果，廣泛應(yīng)用于畜牧生產(chǎn)行業(yè)。過度使用磺胺類藥物飼養(yǎng)會通過動物食可用組織積累在人體內(nèi)，有嚴(yán)重副作用和致癌性，對人體健康造成損害。我國規(guī)定所有使用動物的肌肉、脂肪肝、腎臟食品中磺胺類藥物的最大殘留量為0.1 mg/kg。因此對于可食用動物組織中的磺胺類藥物殘留的檢測技術(shù)極其重要。

磺胺類藥物檢測方法主要有液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、酶聯(lián)免疫發(fā)等。其中2014年農(nóng)質(zhì)發(fā)發(fā)布的檢測方法中以高效液相色譜法為檢測標(biāo)準(zhǔn)，目前許多檢測實驗室開發(fā)了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行樣品中磺胺類藥物的殘留，提高了檢測方法分辨率和檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。目前以官方權(quán)威的高效液相色譜法為例，對完整實驗過程和所需試劑和儀器設(shè)備進(jìn)行介紹，液相色譜-質(zhì)譜儀聯(lián)用方法也會在文末補(bǔ)充質(zhì)譜儀設(shè)置參數(shù)。

磺胺類藥物殘留檢測方法

可食用動物組織磺胺類藥物殘留檢測實驗流程

圖1 可食用動物組織磺胺類藥物殘留檢測實驗流程

1.試劑配置

配置95%、80%乙腈溶液（含0.2%甲酸），配置標(biāo)準(zhǔn)液儲備液1mg/mL，梯度稀釋配置樣品工作液，配置完成后保存。

2.樣品前處理

取檢測樣品和對照樣品利用高速分散器（高速勻漿機(jī)）對樣品進(jìn)行均質(zhì)分散，利用超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)對細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步破碎，完全釋放出細(xì)胞內(nèi)含物。

我們新芝為客戶提供兩種能夠進(jìn)行組織分散儀器，S10手提式高速勻漿機(jī)以及XHF-DY高速分散器分別能夠故處理小體積（1-120mL）和大體積（3-1000mL）處理量，供需選擇。同時提供超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)SCIENTZ-IID進(jìn)行（0.5-600mL樣品量）細(xì)胞的破碎處理。

下圖是具體性能和參數(shù)：

S10手提式高速勻漿機(jī)性能圖

圖2 S10手提式高速勻漿機(jī)性能圖

XHF-DY高速分散器性能圖

圖3 XHF-DY高速分散器性能圖

超聲細(xì)胞破碎儀性能

圖4 超聲細(xì)胞破碎儀性能

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別準(zhǔn)確量取磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)品工作液，用梯度稀釋成濃度為0.05、0.1、0.5、1.0、5.0μg/mL（流動相稀釋）系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液并進(jìn)行測量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

4.提取

稱取試料5（±0.05）g于50 mL離心管中，加入無水硫酸鈉4 g，乙腈15 mL，以10000r/min以上的速度均質(zhì)60 s后，以5000 r/min速度離心5 min，將上層溶液轉(zhuǎn)移到另一離心管中，下層殘渣加乙腈15 mL，渦旋混勻1 min，5000 r/min速度離心5 min，合并兩次的上清液于同一離心管中，加正己烷10 mL，振蕩5 min，靜置或離心分層后，取下層液體，加入正丙醇5 mL，50℃氮吹干，加95%乙腈溶液3 mL，渦旋混合1 min，超聲萃取2 min，作為備用液。

新芝能夠為客戶提供高速冷凍離心機(jī)HSC-2015L和HSC-3020L兩款，其中HSC3020L是前一款的升級款。提供DT系列的超聲波清洗機(jī)，助力超聲萃取，提高檢測準(zhǔn)確度。同時可應(yīng)用于超濾和液相檢測前脫氣功能：

高速冷凍離心機(jī)性能圖

圖5 高速冷凍離心機(jī)性能圖

超聲清洗機(jī)性能圖

圖6 超聲清洗機(jī)性能圖

5.樣品凈化

取95%乙腈溶液3mL活化堿性氧化鋁小柱，將上述備用液全部過柱。用95%乙腈溶液5mL滌雞心瓶后過柱，不收集，擠干或負(fù)壓抽干柱子里的液體，用80%乙腈溶液10mL洗脫，收集洗脫液，加入正丙醇5 mL后，50℃氮吹干，準(zhǔn)確加入流動相溶解2.0mL，渦旋混合1 min，超聲2 min，過0.22μm濾膜后，取濾液上機(jī)分析。

6.測定

高效液相色譜參考條件

色譜柱： C18，250mm×4.6mm（i.d.），粒徑5μm，或相當(dāng)者；

流動相：乙腈-甲醇-水-冰乙酸(2+2+9+0.2)；

流速：1mL/min；

檢測波長：270nm；

進(jìn)樣量：20μL；

柱溫：30 ℃

質(zhì)譜儀參考條件（AB SCIEX API 4000+質(zhì)譜聯(lián)用儀）

電噴霧離子源（ESI）：正離子電離模式；

去溶劑溫度：550 °C；

氣簾氣壓力：172 kPa；

碰撞氣壓力：41 kPa；

離子氣1壓力：414 kPa；

離子氣2壓力：379 kPa；

噴霧電壓：5500 V；

掃描方式：依賴保留時間的多反應(yīng)監(jiān)測（scheduled MRM）

7.結(jié)果計算和表述

以上，就是我們新芝生物能為磺胺類藥物殘留檢測實驗提供的儀器清單，供需查詢。詳情請登錄我們的官方網(wǎng)頁tourxj.net

參考文獻(xiàn)

1. 通過型固相萃取凈化-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測雞肉中23種磺胺類藥物殘留

2. 超高效液相色譜超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時快速檢測雞蛋中7676種藥物殘留量的研究種藥物殘留量的研究

3. 飼料中磺胺類藥物檢測方法研究

4. 農(nóng)質(zhì)發(fā)(2014)5號文件-磺胺類藥物在動物可食性組織中殘留的

高效液相色譜檢測方法

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磺胺類藥物殘留檢測方法

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