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八戒:猴哥救我!
悟空:呆子,何事慌張!
八戒:猴哥你沒(méi)聽(tīng)說(shuō)嗎!非洲豬瘟來(lái)了,一個(gè)被傳染,一窩都遭殃啊!我聽(tīng)說(shuō)遼寧、黑龍江、吉林、江西、福建、四川好多兄弟都已經(jīng)被撲殺了。
悟空:呆子!那還不離我遠(yuǎn)點(diǎn)!
問(wèn)題一、什么是非洲豬瘟?
非洲豬瘟(African Swine fever,ASF)是由非洲豬瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)感染家豬和各種野豬(不傳染人)引起一種急性、出血性、烈性傳染病。其特征是發(fā)病過(guò)程短,最急性和急性感染死亡率高達(dá)100%,且只能依靠實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)確診。
2018年8月3日我國(guó)確診首例非洲豬瘟疫情。
問(wèn)題二、目前在中國(guó)的傳染范圍?
自8月初我國(guó)首次發(fā)現(xiàn)非洲豬瘟以來(lái),截至11月22日,全國(guó)有20個(gè)省份47個(gè)市(區(qū)、盟)發(fā)生73起家豬疫情、1起野豬疫情,累計(jì)撲殺生豬60萬(wàn)頭。全國(guó)非洲豬瘟疫情呈現(xiàn)多點(diǎn)散發(fā)狀態(tài),但在各地動(dòng)物疾控部門的積極行動(dòng)下,疫情開(kāi)始趨于平穩(wěn),總體防控有效。
問(wèn)題三、非洲豬瘟檢測(cè)的樣品處理方法介紹
一、非洲豬瘟樣品處理
1. 目的
規(guī)范ASFV樣品和實(shí)驗(yàn)材料的處理程序,保證ASFV相關(guān)實(shí)驗(yàn)的順序開(kāi)展和實(shí)驗(yàn)室的生物安全。
2. 適用范圍
適用于疑似ASFV臨床樣品的實(shí)驗(yàn)前的處理
3. 程序
3.1實(shí)驗(yàn)材料
ASF的易感動(dòng)物,主要為家豬、野豬和蜱,通常采集的樣品為家豬、野豬的血液樣品、組織樣品以及蜱三類。田間采集的樣品通常需要經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的預(yù)處理,才能進(jìn)行后續(xù)的檢測(cè)、診斷工作。
血清:用于病毒核酸檢測(cè)、病毒抗原和抗體檢測(cè)。將采好的豬血的注射器或采血管在室溫下傾斜靜止2~4h(防止暴曬),或置于37℃溫箱內(nèi)1h,待大部分血清析出后,取出血清,必要時(shí)經(jīng)離心分離血清。(最低建議量5ml)。
抗凝全血:用于病毒核酸檢測(cè)和病毒抗原檢測(cè)。
采血前,在真空采血管或注射器內(nèi)按比例加入抗凝劑。采集血液,輕輕上下顛倒,使血液與抗凝劑充分混勻,防止血液凝固的同時(shí)避免溶血。也可以將血液放入裝有玻璃珠的滅菌瓶?jī)?nèi),震蕩脫落纖維蛋白。必要時(shí),可加入雙抗以抑制血源性或采血過(guò)程中可能出現(xiàn)的細(xì)菌污染。
當(dāng)血樣用于病毒核酸檢測(cè)時(shí),一般不用肝素而選用EDTA作為抗凝劑。(最低建議量1mL)。
組織樣本:活體采集,采用扁桃體,用于臨床健康動(dòng)物ASF監(jiān)測(cè)。
尸體剖檢ASF發(fā)病動(dòng)物或死亡動(dòng)物經(jīng)解剖取材,包括:ASFV靶器官的采集:脾臟、淋巴結(jié)、腎臟、扁桃體。
其他病變組織臟器的采集:采集具有明顯病變的肝臟、肺臟、心臟等組織器官,選取部位在病變和健康組織交界處。
腐敗動(dòng)物尸體的樣品采集:剖檢取股骨,將附著的肌肉和韌帶等全部剔除,采集骨髓。最低建議量5克。
蜱的采集:蜱可進(jìn)行核酸檢測(cè)、抗原檢測(cè)和蜱的形態(tài)學(xué)鑒定,查找豬圈的墻邊、墻縫、木質(zhì)或瓦質(zhì)的屋頂,或挖掘豬圈地面均可能找到蜱,也可查看豬表皮,采集蜱。
1-1樣品保存條件
樣品名稱 \ 溫度要求或條件 | 采集過(guò)程 | 運(yùn)輸及檢測(cè)過(guò)程 | 長(zhǎng)期保存 | |
血 液 | 抗凝血 | 冷藏 | 冷藏 | -70℃或者-196℃ |
血清 | 冷藏 | 冷藏 | -70℃或者-196℃ | |
肝血濾紙片 | 常溫 | 常溫 | - | |
濾紙 | 冷藏或常溫 | 冷藏或常溫 | 冷藏或常溫 | |
組 織 | 固定組織 | 常溫 | 常溫 | 常溫 |
組織觸片 | 常溫 | 常溫 | - | |
新鮮組織 | 冷藏 | 冷藏或常溫 | -70℃或者-196℃ | |
蜱蟲(chóng) | 活體 | 15℃~22℃ | 15℃~22℃ | 15℃~22℃(血飼)[9.19] |
固定 | 常溫 | 常溫 | 常溫 | |
速凍 | -70℃或者-196℃ | -70℃或者-196℃ | -70℃或者-196℃ |
注:用于病毒分離和病理學(xué)檢測(cè)的樣品禁止-20℃保存。
3.2實(shí)驗(yàn)器材和試劑
臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、組織研磨儀、水浴鍋、計(jì)時(shí)器、冰箱和移液器等。
無(wú)菌的剪子、鑷子、鋼珠、2mLEP管、移液器吸頭(10μL,200μL、1000μL)等。
其他試劑和耗材主要包括:0.01mol/L PBS(PH7.2)、0.8%NaOH、75%酒精棉球等。
3.3樣品處理程序
3.3.1血清及全血樣品處理
取血清或全血樣品1mL于滅菌EP管里,保存?zhèn)溆?/p>
3.3.2組織樣品處理
適用于脾臟等組織樣品和蜱的處理。盡可能減少污染,每取一個(gè)組織塊或蜱,用火焰消毒剪鑷等取樣器械,組織塊應(yīng)分別放入滅菌容器內(nèi)并立即密封,做好標(biāo)記,注意防止組織間相互污染。
3.3.2.1組織樣品的處理應(yīng)在二級(jí)生物安全柜中進(jìn)行,勿使液體濺到生物安全柜中。
3.3.2.2將0.1-0.2g組織塊放入2mLEP管中,用剪刀剪成碎塊,加1-2mL0.01mol/L PBS(PH7.2),再加入1-2粒滅菌鋼珠,密封后,表面消毒備用。剩余樣品放回容器內(nèi),重新密封,表面消毒后保存-70℃冰箱。
3.3.2.3組織樣品的破碎可以利用組織研磨儀在生物安全柜外操作,將樣品制成組織懸液。
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3.4病毒滅活
病毒的滅活處理應(yīng)在二級(jí)生物安全柜中進(jìn)行,將處理好的血清、全血或者研磨破碎后的組織樣品連同EP管放入60℃水浴中,放置30min滅活。
3.5使用后儀器處理
剪刀、鑷子等均應(yīng)放入消毒缸進(jìn)行消毒,放入鐵飯盒內(nèi),并裝入密封袋內(nèi)進(jìn)行高壓滅菌處理。裝有組織樣品保存液的容器和盛有組織塊的離心管應(yīng)密封管口,表面消毒后放入密封袋中高壓滅菌。鋼珠、吸頭等廢棄物應(yīng)用0.8%NaOH浸泡30分鐘消毒后,置密封袋內(nèi)高壓滅菌。消毒殘液應(yīng)裝入密封容器內(nèi)高壓滅菌處理。
3.6注意事項(xiàng)
操作之前要確認(rèn)生物安全柜和實(shí)驗(yàn)室已進(jìn)行了徹底的衛(wèi)生消毒處理,防止樣品間交叉感染。
二、非洲豬瘟病毒的核酸檢測(cè)可用實(shí)時(shí)熒光PCR配套相應(yīng)實(shí)際進(jìn)行,具體操作步驟以儀器生產(chǎn)公司指南為準(zhǔn)。
問(wèn)題四、病毒殺滅和防控方式
非洲豬瘟病毒雖然在環(huán)境中比較穩(wěn)定,但在豬肉烹煮處理過(guò)程中較易失活,70℃-75℃>加熱30分鐘以上,病毒就會(huì)被殺滅,也就是說(shuō)我們?nèi)粘E腼冞^(guò)程中只要把豬肉熟透(包括最中間部位溫度至少達(dá)到70℃以上),即使有病毒也會(huì)很快失去感染力并喪失活性。
新芝生物Scientz-48L冷凍型高通量組織研磨器介紹
新芝生物推出的Scientz-48L冷凍型高通量組織研磨器具備以下特征:
1.應(yīng)用場(chǎng)景多樣??梢詫?duì)不同組織進(jìn)行干磨、濕磨、混合以及均質(zhì)化處理。
2.實(shí)驗(yàn)效率高。能提高提取大通量樣品中核酸的效率和質(zhì)量。
3.實(shí)驗(yàn)過(guò)程安全。研磨過(guò)程采用封閉式一次性離心管,有效地避免了樣品交叉污染。
4.儀器穩(wěn)定性好。對(duì)同一組織樣品可設(shè)定相同的研磨程序,從而獲得相同的研磨效率,提高了實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。
5.研磨效果好。產(chǎn)品采用高效研磨球進(jìn)行研磨,相較于傳統(tǒng)研磨方式對(duì)樣品的研磨更為均勻、充分。
目前,新芝生物Scientz-48L冷凍型高通量組織研磨器已助力沈陽(yáng)、大連、朝陽(yáng)、本溪、鞍山、錦州、葫蘆島等多地動(dòng)物疾控中心用于非洲豬瘟檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的樣品前處理。
Scientz-48L冷凍型高通量組織研磨器高效、穩(wěn)定、安全的儀器特性很好地解決了檢測(cè)過(guò)程中檢測(cè)樣品數(shù)量多、實(shí)驗(yàn)一致性難以控制等問(wèn)題,得到了廣大用戶的一致好評(píng)。
產(chǎn)品用途
1.適用于各種植物組織包括根、莖、葉、花、果、種子等樣品的研磨破碎;
2.適用于各種動(dòng)物組織包括大腦、心臟、肺、胃、肝臟、胸腺、腎臟、腸、淋巴結(jié)、肌肉、骨骼等樣品的研磨破碎;
3.適用于真菌、細(xì)菌等樣品的研磨破碎;
4.適用于食品、藥品成分分析檢測(cè)的研磨破碎;
5.適用于易揮發(fā)樣品包括煤炭、油頁(yè)巖、蠟制品等樣品的研磨破碎;
6.適用于塑料、聚合物包括PE、PS、紡織品、樹(shù)脂等樣品的研磨破碎。
主要技術(shù)參數(shù)
1.時(shí)間設(shè)定:1(秒)-9999(秒)
2.頻率設(shè)定:10-70Hz,即振蕩300-2100次/min
3.額定功率:180W
4.夾具行程:34mm(垂直)
5.溫度設(shè)置 : -20℃或者-30℃
6.電磁鎖控制開(kāi)門
7.樣品容量:隨機(jī)標(biāo)配:鋁合金適配器5ml 12孔,2ml 48孔
可選配:鋁合金適配器2ml24孔
8.電源需求:220V單相交流,<2.5A
新芝生物公司簡(jiǎn)介
寧波新芝生物科技股份有限公司(股票代碼:430685)始創(chuàng)于1989年,公司總部位于寧波市國(guó)家高新區(qū),注冊(cè)資金6102萬(wàn)元,是全球知名的生物樣品處理設(shè)備提供商,也是國(guó)內(nèi)超聲波技術(shù)應(yīng)用探索的先行者。
依托強(qiáng)大的科研技術(shù)實(shí)力,公司在超聲波、溫濕度、高低壓、超低溫等技術(shù)層面積累了豐厚的經(jīng)驗(yàn),并先后研究開(kāi)發(fā)包括生物樣品前處理儀器、分子生物學(xué)儀器、實(shí)驗(yàn)室潔凈設(shè)備、冷凍干燥設(shè)備、工業(yè)防垢除垢設(shè)備、環(huán)保除藻防控設(shè)備在內(nèi)的多款產(chǎn)品。公司始終堅(jiān)持業(yè)界前沿的技術(shù)研究和應(yīng)用開(kāi)發(fā),致力于為科研、教育、環(huán)保、醫(yī)療、制藥、石化、農(nóng)林、材料等領(lǐng)域客戶提供先進(jìn)的產(chǎn)品設(shè)備和行業(yè)解決方案。
公司目前擁有寧波、杭州兩地四大研發(fā)中心,擁有高水平研發(fā)人員數(shù)十人,專利60余項(xiàng)。公司曾多次承擔(dān)國(guó)家科技部、發(fā)改委、衛(wèi)生部重大科研項(xiàng)目,是國(guó)家發(fā)改委高技術(shù)產(chǎn)業(yè)化示范工程中心、科學(xué)儀器產(chǎn)業(yè)化基地、寧波企業(yè)工程(技術(shù))中心。公司研制的高壓氣體基因槍一舉打破國(guó)外技術(shù)壟斷,填補(bǔ)國(guó)內(nèi)相關(guān)領(lǐng)域空白,榮獲浙江省科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)。
公司高度重視品牌培育和市場(chǎng)開(kāi)拓,為更好地服務(wù)客戶,公司在全國(guó)各地建有30余個(gè)辦事處,辦事處均配備銷售工程師和售后工程師,可隨時(shí)滿足客戶需求。全球超過(guò)15,000家實(shí)驗(yàn)室在使用新芝生物的產(chǎn)品,各類儀器設(shè)備市場(chǎng)保有量超過(guò)100,000臺(tái)套,產(chǎn)品遠(yuǎn)銷美、英、法、俄、日、韓等36個(gè)國(guó)家,公司年度銷售收入突破1億元人民幣,已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)乃至全球知名的生物樣品制處理設(shè)備研制專家。
新芝生物30年風(fēng)雨兼程,以新致心,將繼續(xù)致力于為各行業(yè)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和貼心的服務(wù)!
新芝生物專業(yè)研發(fā)生產(chǎn)超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)、超聲波清洗機(jī)和超聲波細(xì)胞破碎儀等各種科研實(shí)驗(yàn)儀器與工業(yè)化生產(chǎn)設(shè)備
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